آزمون سمیت سلولی ARE
الزام دریافت تأییدیه برای تجهیزات پزشکی، مواد اولیه، محصولات آرایشی و دارویی
خلاصه آزمون
زمینه و هدف: ارزیابی زیستسازگاری مواد و تجهیزات پزشکی مطابق استاندارد ISO 10993-5 نیازمند بررسی اثرات نامطلوب مواد بر سلولهای زنده است. اگرچه آزمونهای متداول سمیت سلولی عمدتاً بر کاهش بقا یا تکثیر سلول تمرکز دارند، بسیاری از مواد پیش از ایجاد مرگ سلولی میتوانند موجب استرس اکسیداتیو و فعالسازی مسیرهای دفاعی درونسلولی شوند. آزمون Antioxidant Response Element (ARE) یک روش مبتنی بر ژن گزارشگر است که برای شناسایی فعال شدن مسیر Nrf2-ARE در پاسخ به ترکیبات دارای پتانسیل ایجاد استرس اکسیداتیو بهکار میرود. هدف از این آزمون، ارزیابی توانایی نمونه در القای پاسخهای آنتیاکسیدانی سلولی و شناسایی اثرات اولیه سمیت مرتبط با تولید گونههای فعال اکسیژن (ROS) است.
روش انجام: تست ارزیابی استرس اکسیداتیو ARE بر اساس اصول ارزیابی زیستسازگاری سلولی مندرج در ISO 10993-5 انجام میشود. ابتدا عصاره ماده مورد آزمون تحت شرایط استاندارد استخراج تهیه شده و پس از استریلسازی، بر روی سلولهای گزارشگر حاوی توالی ARE و ژن لوسیفراز اعمال میگردد. سلولها در شرایط کنترلشده دمایی و CO₂ انکوبه شده و برای مدت مشخص در معرض نمونه قرار میگیرند. در صورت ایجاد استرس اکسیداتیو، فاکتور رونویسی Nrf2 فعال شده و با اتصال به ناحیه ARE سبب افزایش بیان ژن گزارشگر میشود. پس از پایان دوره تماس، معرف لوسیفراز افزوده شده و شدت نور تولیدی توسط لومینومتر اندازهگیری میشود. میزان پاسخ سلولی بهصورت Fold Induction یا Relative Luciferase Activity نسبت به کنترل منفی محاسبه و تحلیل میگردد.
یافتهها و طبقهبندی: نتایج آزمون ARE نشان میدهد که سلولها در مواجهه با مواد القاکننده استرس اکسیداتیو افزایش معنیداری در فعالیت ژن گزارشگر از خود نشان میدهند. افزایش شدت سیگنال لوسیفراز بیانگر فعال شدن مسیر Nrf2-ARE و تحریک مکانیسمهای دفاع آنتیاکسیدانی سلول است. بر اساس میزان القای پاسخ، مواد را میتوان در گروههای مختلف طبقهبندی نمود: مواد فاقد فعالیت قابلتوجه (عدم افزایش معنیدار نسبت به کنترل)، مواد با فعالیت خفیف تا متوسط (افزایش محدود و وابسته به دوز) و مواد با فعالیت شدید (افزایش قابلتوجه و پایدار در بیان ژن گزارشگر). وجود رابطه وابسته به غلظت میان میزان تماس و پاسخ سلولی، اعتبار نتایج آزمون را تقویت میکند. همچنین مقایسه با کنترل مثبت امکان ارزیابی حساسیت سیستم آزمون را فراهم میسازد.
نتیجهگیری: تست ارزیابی استرس اکسیداتیو ARE ابزاری حساس و کارآمد برای شناسایی پاسخهای سلولی مرتبط با استرس اکسیداتیو است و میتواند اطلاعات ارزشمندی در خصوص مکانیسمهای اولیه سمیت فراهم کند. این آزمون اگرچه جایگزین آزمونهای کلاسیک سمیت سلولی مندرج در ISO 10993-5 نیست، اما بهعنوان یک روش مکمل قادر است اثرات زیرآستانهای مواد را پیش از بروز آسیب شدید سلولی آشکار سازد. استفاده از آزمون ARE در کنار سایر روشهای ارزیابی زیستسازگاری، درک جامعتری از ایمنی بیولوژیکی مواد و تجهیزات پزشکی فراهم کرده و به بهبود فرآیند ارزیابی خطر کمک میکند.
واژگان کلیدی: ARE Assay، Nrf2-ARE Pathway، Oxidative Stress، Cytotoxicity Assessment، ISO 10993-5، Reporter Gene Assay، Luciferase Activity، Reactive Oxygen Species (ROS)، Biocompatibility Evaluation، Medical Devices
آزمون های مشابه
تصویر خلاصه آزمون
⚠️ الزامات قانونی
انجام آزمون ARE برای اخذ پروانه ساخت، کد IRC و تاییدیه سازمان غذا و دارو جهت ورود به بازار ایران و بازارهای بینالمللی برای تمامی تجهیزات پزشکی که با پوست تماس دارند الزامی است. این آزمون در استاندارد ISO 10993-10 به عنوان یک روش برون تنی و جایگزین معتبر برای آزمونهای حیوانی معرفی شده است.
تست سمیت سلولی ARE
⚠️ تکمیل و ارسال کلیه مدارک و فرمهای مورد نیاز پیش از ارسال نمونه به آزمایشگاه الزامی است. لطفاً مدارک را بهصورت کامل و صحیح ارسال نمایید. در صورت وجود نقص یا مغایرت در اطلاعات، فرآیند پذیرش نمونه، بررسی فنی و شروع آزمون با تأخیر مواجه خواهد شد.
⚠️ پیش از ارسال نمونه، لطفاً الزامات و شرایط حمل، نگهداری و بستهبندی نمونه را به دقت مطالعه نموده و جهت اطمینان از پذیرش صحیح نمونه، با واحد پذیرش آزمایشگاه هماهنگی لازم را انجام دهید.
⚠️ جهت دریافت هزینه دقیق و بهروز آزمونها، لطفاً فرم درخواست آزمون را از طریق پیامرسان بله یا ایمیل برای آزمایشگاه ارسال نمایید. درخواست شما توسط کارشناسان فنی بررسی شده و هزینه نهایی بر اساس نوع آزمون، تعداد نمونهها و الزامات مطالعه اعلام خواهد شد.
⚠️ گزارش نهایی آزمون پس از تکمیل تمامی مراحل آزمایش، بررسی نتایج و تأیید واحد کنترل کیفیت، در کوتاهترین زمان ممکن صادر شده و حداکثر ظرف 10 روز کاری در قالب گزارش رسمی انگلیسی به متقاضی تحویل خواهد شد.
